La electroporation es un método de transfección física que utiliza un pulso eléctrico para crear poros temporales en las membranas celulares a través de las cuales sustancias como los ácidos nucleicos pueden pasar a las células.

Es una estrategia altamente eficiente para la introducción de ácidos nucleicos extraños en muchos tipos de células, incluidas las bacterias y las células de mamíferos.

Electroporation usa Pequeñas corrientes estimulantes de RF y EMF activan las células de la piel, haciendo que las cremas e ingredientes para el cuidado de la piel se adsorban diez veces mejor.

Su crema o gel elegido se absorbe en la capa dérmica que no puede alcanzar mediante la aplicación normal. Esta fue una técnica desarrollada por Michel Pistor, un médico francés en los años 50.

 

Cómo Funciona la Electroporation

La electroporation se basa en un proceso simple. Las células huésped y las moléculas seleccionadas se suspenden en una solución conductora y se cierra un circuito eléctrico alrededor de la mezcla.

Un pulso eléctrico a un voltaje optimizado y que solo dura unos pocos microsegundos a un milisegundo se descarga a través de la suspensión celular. Esto perturba la bicapa de fosfolípidos de la membrana y da como resultado la formación de poros temporales.

El potencial eléctrico a través de la membrana celular aumenta simultáneamente para permitir que las moléculas cargadas como el ADN sean conducidas a través de la membrana a través de los poros de manera similar a la electroforesis.

La principal ventaja de la electroporation es su aplicabilidad para la transfección transitoria y estable de todos los tipos de células. Además, debido a que la electroporation es fácil y rápida, es capaz de transfectar una gran cantidad de células en poco tiempo una vez que se determinan las condiciones óptimas de electroporation.

El principal inconveniente de la electroporation es la muerte celular sustancial causada por pulsos de alto voltaje y una reparación de membrana solo parcialmente exitosa, que requiere el uso de mayores cantidades de células en comparación con los métodos de transfección química.

Si bien la instrumentación más moderna, como el Sistema de transfección Neon, supera la alta mortalidad celular al distribuir el pulso eléctrico por igual entre las células y mantener un pH estable en toda la cámara de electroporation.

 

Transfección Neon para Electroporation

El sistema de transfección Neon es un sistema de transfección de segunda generación que utiliza una punta de pipeta electrónica como cámara de electroporación.

El diseño y el rendimiento de la cámara de transfección electrónica de pipetas Neon® dan como resultado una mayor viabilidad celular y eficiencia de transfección en comparación con los sistemas tradicionales de electroporation basados ​​en cubetas.

El sistema de transfección Neon ha ayudado a muchos investigadores a mejorar sus experimentos de transfección. El sistema fue diseñado para la electroporation de células de mamíferos, pero algunos clientes han encontrado que es exitoso para otros tipos de células, como cultivos de células de insectos y parásitos.

Las ventajas de este método son:

  • Versatilidad : la electroporación con el sistema Neon es efectiva con los tipos de células de mamíferos
  • Eficiencia : un alto porcentaje de células se transfecta sin comprometer la viabilidad
  • Flexibilidad : se puede utilizar un rango de números de celdas: de 10 4 a 10 6 celdas
  • Simplicidad : solo un kit para todos los tipos de células
  • Novedad : el sistema Neon emplea una cámara de electroporación única, tan fácil de usar como una pipeta y con una forma circular que ofrece ventajas sobre los sistemas basados ​​en cubetas.

El diseño de la cámara de electroporation distribuye la corriente por igual entre las células y mantiene un pH estable en toda la cámara; Estos beneficios clave aumentan la viabilidad celular dramáticamente.

 

Electroporation Belleza Facial

Tratamiento de electroporación (MESOTERAPIA ligera sin aguja) para el área de la cara y el cuello. La lámpara de electroporación ayuda a soportar los efectos antienvejecimiento del estrés y la vida. 5 modos de luz diferentes que tratan diferentes problemas.

Terapia reafirmante y antiarrugas de la piel que cura las bolsas de los ojos y ayuda a la adsorción de cremas en la capa de derma Para mejores resultados, use con un gel.

 

Electroporation Machine

Utiliza un haz de onda específico de 633 nm en auxiliar del dispositivo de presión negativa de vacío, estimula y renace el vaso capilar instantáneamente cuando se absorbe la piel, la frecuencia de RF bipolar de 2,69 MHz afectará la piel absorbente, y calentar la dermis y la capa de grasa subcutánea.

Después de absorber el calor, el triglicérido en el tejido adiposo se convierte en ácido graso libre y glicerina que se metabolizarán de forma natural, logrando el efecto de la eliminación de arrugas, reductora de grasa y la formación de grasa.

ELECTROPORACION

 

Electroporation Cuvettes

Las cubetas desechables codificadas por colores se adaptan a la mayoría de los electroporadores. Esterilizado por irradiación gamma y suministrado envuelto individualmente.

Las cubetas desechables codificadas por colores son compatibles con la mayoría de los electroporadores.

  • Policarbonato transparente de grado médico para una alta visibilidad.
  • El aluminio pulido reduce la frecuencia de arco
  • La tapa redonda permite la extracción con una sola mano.
  • FB102 tiene electrodos de aluminio incrustados

Eelectroporation Bio Rad

Los instrumentos de electroporación disponibles incluyen electroporadores de cubeta simple para todos los tipos de células.
El tampón de electroporación universal se proporciona para aumentar la eficiencia de la transfección celular.

Sistemas de electroporación Gene Pulser Xcell

Los sistemas de electroporación modular Gene Pulser Xcell incluyen una unidad principal, dos módulos accesorios y la cámara de cubeta ShockPod ™.

Tampón de electroporación Gene Pulser

El tampón de electroporación Gene Pulser está formulado para mejorar las tasas de transfección celular al minimizar la mortalidad celular al tiempo que garantiza la entrega altamente eficiente de ácidos nucleicos.

Electroporador MicroPulser

El electroporador MicroPulser es un instrumento simple pero versátil que permite la transformación segura y reproducible de bacterias, levaduras y otros microorganismos.

Gene Pulser – MicroPulser Electroporation Cuvettes

La salida de pulso de precisión de los sistemas Micropulser, Gene Pulser II, Gene Pulser Xcell y Gene Pulser MXcell se corresponde con cubetas de electroporación de alta calidad libres de materiales inhibidores de trazas.

Sistema de electroporación Gene Pulser MXcell

Los sistemas de electroporación Gene Pulser MXcell ya no están disponibles, pero los usuarios actuales pueden solicitar placas y cubetas de electroporación para sus aplicaciones de transfección.

 

Radiofrecuencia

Calentamiento de la dermis a través de ondas de alta frecuencia, y es muy eficaz para mejorar la flacidez de la piel, las arrugas, promover la circulación linfática y sanguínea.

 

Fototerapia LED

La fototerapia LED repara y cura los huecos mirco de la electroporación, la mesoterapia sin aguja de la piel ultrafina, los poros de la piel y tiene un efecto antiinflamatorio calmante.

Se centra en Nutrición y nutrición de la piel de la cara y el cuello, es muy eficaz para eliminar el acné, reducir los poros, anti arrugas, endurecer y blanquear.

 

Mesoporación

La penetración de importación de nutrición en comparación con los iones de la superficie de la piel es de 1 mm aproximadamente 10 veces, 4 mm aproximadamente 27 veces.

Los ingredientes activos en la piel pueden garantizar. Que puede funcionar de manera eficiente, por lo que realmente siente la mejora de la piel y retrasa el efecto del envejecimiento.

RF

Para desintoxicación, drenaje linfático, mejora la circulación sanguínea. La energía eléctrica tiende a seguir la distancia más corta entre dos electrodos. Cuando la electricidad atraviesa el tejido vivo.

El flujo de alta energía genera calor como una característica de la energía eléctrica y la resistencia a la electricidad del tejido vivo. Esta es otra característica del Dr. Arrivo que adapta la electricidad para ser suave con la piel.

 

Electroporation Protocol

Prepare tubos de cultivo de fondo redondo de 17 mm x 100 mm, como por ejemplo VWR # 60818-667 a temperatura ambiente. Coloque el medio de recuperación de SOC en un baño de agua a 37 ° C.

Precaliente las placas selectivas a unos 37° C, esto durante 1 hora. Luego coloque las cubetas de electroporación de 1 mm y los tubos de microcentrífuga en hielo. Como control positivo para la transformación, diluya el control pUC19 en 1: 5 a una concentración final de 10 pg / μl usando agua estérilizada.

Las reacciones de ligadura desnaturalizadas por calor se pueden usar para electroporación directamente; Sin embargo, se recomienda la purificación de la columna.

Descongele las células NEB Turbo Electrocompetent en hielo (aproximadamente 10 minutos) y mezcle las células moviéndolas suavemente. Transfiera 25 μl de las células (o la cantidad especificada para las cubetas) a un tubo de microcentrífuga refrigerado. Añadir 1 μl de la solución de ADN.

Transfiera cuidadosamente la mezcla de células / ADN a una cubeta fría sin introducir burbujas y asegúrese de que las células se depositen en el fondo de la cubeta. Electroporar usando las siguientes condiciones para los electroporadores BTX ECM 630 y Bio-Rad GenePulser: 2.1 kV,
100 Ω y 25 μF. La constante de tiempo típica es ~ 2.6 milisegundos.

Inmediatamente agregue 975 µl de SOC a 37 ° C a la cubeta, mezcle suavemente hacia arriba y hacia abajo dos veces, luego transfiéralas al tubo de cultivo de fondo redondo de 17 mm x 100 mm.

Agite vigorosamente (250 rpm) o gire a 37 ° C durante 1 hora. Diluya las células según corresponda y luego extienda 100-200 μl de células en una placa selectiva precalentada. Incubar las placas de 8 horas a toda la noche a 37 ° C.

 

Transfección

Ampliamente la transfección se basa en la introducción de material genético de afuera, en células eucariotas, aplicando a través de plásmidos, también se pueden usar otras herramientas para hacer la transferencia.

 

Métodos de Transfección

Cuando esté probando un nuevo método de transfección o simplemente buscando una recomendación, esta sección cubre métodos y técnicas de transfección comunes.

Transfección de Lípidos Catiónicos

Los lípidos catiónicos especialmente diseñados facilitan la entrega de ADN y ARNsi a las células.  Los lípidos catiónicos especialmente diseñados, como los reactivos de transfección Lipofectamine®, facilitan el suministro de ADN y ARNsi a las células.

La estructura básica de los lípidos catiónicos consiste en un grupo de cabeza con carga positiva y una o dos cadenas de hidrocarburos. El grupo de cabeza cargada gobierna la interacción entre el lípido y el esqueleto de fosfato del ácido nucleico, y facilita la condensación de ADN.

A menudo, los lípidos catiónicos se formulan con un co-lípido neutro o un lípido auxiliar, seguido de extrusión o microfluidización, lo que da como resultado una estructura liposomal unilamelar con una carga superficial positiva cuando está en agua.

La carga superficial positiva de los liposomas media la interacción del ácido nucleico y la membrana celular, lo que permite la fusión del complejo de transfección de liposoma / ácido nucleico con la membrana celular cargada negativamente. Se cree que el complejo de transfección ingresa a la célula a través de la endocitosis.

La endocitosis es el proceso en el que una región localizada de la membrana celular absorbe el ADN: complejo de liposomas formando una vesícula unida a la membrana  intracelular.

Electroporación

Transfección mecánica que impulsa los impulsos eléctricos para crear poros temporales en las membranas celulares.

En Vivo La transfección

Reactivos de administración de ARNi in vivo efectivos y fáciles de usar utilizados para lograr alternancias fenotípicas en animales. El reactivo Invivofectamine 3.0 es un reactivo innovador para la administración in vivo de RNAi, con un rendimiento muy mejorado y una reducción de hasta el 85% lograda usando niveles de microgramos de siRNA

 

Cotransfección

Transfección simultánea de 2 moléculas de ácido nucleico separadas.  La cotransfección se refiere a la transfección simultánea con dos moléculas de ácido nucleico separadas, como el ADN plasmídico y el ARNip. La cotransfección es un procedimiento común para la transfección estable. El ADN plasmídico puede contener un gen que se analiza fácilmente y actúa como marcador.

Para que esto ocurra, un gen marcador se cotransfecta, lo que le da a la célula una ventaja de selección, por ejemplo, resistencia a una determinada toxina. Seleccionar el reactivo adecuado para la cotransfección es esencial.

Transfección de ARNi y ARNsi

Inverso transfectado Invitrogen Stealth RNAi o siRNA en células de mamífero en un formato de 24 pocillos

 

Transfección Transitoria

Producción de proteínas rápida, escalable y de alto rendimiento a partir de cultivos en suspensión transfectados transitoriamente.

En la transfección transitoria, el ácido nucleico introducido existe en la célula solo durante un período de tiempo limitado y no está integrado en el genoma. Como tal.

El material genético transfectado transitoriamente no se transmite de generación en generación durante la división celular, y puede perderse por factores ambientales o diluirse durante la división celular.

Sin embargo, el alto número de copias del material genético transfectado conduce a altos niveles de proteína expresada dentro del período que existe en la célula.

Dependiendo de la construcción utilizada, el transgen expresado transitoriamente generalmente se puede detectar durante 1 a 7 días, pero las células transfectadas transitoriamente se cosechan típicamente 24 a 96 horas después de la transfección.

El análisis de productos génicos puede requerir el aislamiento de ARN o proteína para ensayos de actividad enzimática o inmunoensayos. El intervalo de tiempo óptimo depende del tipo de célula, los objetivos de la investigación y las características de expresión específicas del gen introducido.

Así como el tiempo que tarda el reportero en alcanzar el estado estacionario. Sin embargo, en unos pocos días la mayor parte del ADN extraño se degrada por nucleasas o se diluye por división celular; después de una semana, su presencia ya no se detecta.

La transfección transitoria es más eficiente cuando se usa ADN plasmídico superenrollado, presumiblemente debido a su absorción más eficiente por parte de la célula. siRNAs, miRNAs, mRNAs,Factores que influyen en la eficiencia de la transfección ).

Mientras que el ADN transfectado se transloca al núcleo para la transcripción, el ARN transfectado permanece en el citosol, donde se expresa en minutos después de la transfección (ARNm) o se une al ARNm para silenciar la expresión de un gen (ARNip y miARN) (consulte las Directrices para Transfección de ARN ).

 

Transfección Estable

La transfección estable introduce el ADN en las células a largo plazo y pasa el ADN introducido a su progenie. A diferencia de la transfección transitoria, en la que el ADN introducido persiste en las células durante varios días, la transfección estable introduce el ADN en las células a largo plazo.

Las células transfectadas de manera estable pasan el ADN introducido a su progenie, típicamente porque el ADN transfectado se ha incorporado al genoma, pero a veces a través de una herencia estable de ADN no genómico.

La transfección estable exitosa requiere una entrega efectiva de ADN y una forma de seleccionar las células que han adquirido el ADN. Aproximadamente una de cada 10 4 células transfectadas integrará de manera estable el ADN, aunque la eficiencia varía con el tipo de célula y si se usa ADN lineal o circular. La integración es más eficiente cuando se usa ADN lineal.

Transfección de fosfato de calcio

Reactivos para permitir la introducción de ADN en células eucariotas mediante coprecipitación con fosfato de calcio.

 

Transfección CRISPR

Hemos optimizado los protocolos para lograr una alta eficiencia de escisión y facilidad de entrega.

El sistema CRISPR-Cas9 simplifica enormemente la edición del genoma y es muy prometedor en aplicaciones amplias como la ingeniería de células madre, la terapia génica, modelos de enfermedades de tejidos y animales, y la ingeniería de plantas transgénicas resistentes a enfermedades.

La transfección es el proceso por el cual los sistemas de ADN, ARNm y proteínas CRISPR-Cas9 se introducen en las células eucariotas. Las técnicas varían ampliamente e incluyen la transfección mediada por nanopartículas lipídicas, el suministro viral y métodos físicos como la electroporación.

Nuestra familia de reactivos Invitrogen Lipofectamine junto con el Sistema de transfección de neón ofrece soluciones completas de entrega para satisfacer sus necesidades de edición del genoma.